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四環凍干機—安瓿管真空冷凍干燥法

更新時間:2021-08-31 點擊次數:1094

安瓿管真空冷凍干燥法


將微生物冷凍,在減壓下利用升華作用除去水分,使細胞的生理活動趨于停止,從而長期維
持存活狀態。

操作步驟如下:
好氧菌冷凍干燥管的制備
1 安瓿管準備
安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水沖洗干凈后,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后、貼上標簽,標上菌號及時間,加入脫脂棉塞后,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,備用。
2 保護劑的選擇和準備
保護劑種類要根據微生物類別選擇。配制保護劑時,應注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鐘,備用。
3 凍干樣品的準備
在最適宜的培養條件下將細胞培養至靜止期或成熟期,進行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺聯合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規程》(試行)),與保護劑混合均勻,分裝。微生物培養物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升,只需10毫升瓊脂斜面兩支)。采用較長的毛細滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺污上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為半個球部。若是液體培養的微生物,應離心去除培養基,然后將培養物與保護劑混勻,再分裝于安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,最好在1-2小時內分裝完畢并預凍。分裝時應注意在無菌條件下操作。
4 預凍
一般預凍2小時以上,溫度達到-20℃到-35℃左右。
5 冷凍干燥
采用冷凍干燥機進行冷凍干燥。
將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內,開始冷凍干燥,時間一般為8-20小時。
6 真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細,然后采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。
熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度。
7 保藏
安瓿管應低溫避光保藏。
8 質量檢查
冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查,如存活率、生產能力、形態變異、雜菌污染等。
厭氧菌冷凍干燥管的制備
主要程序與需氧菌操作相同,注意保護劑的選擇和準備,保護劑使用前應在100℃的沸水中煮沸15分鐘左右,脫氣后放入冷水中急冷,除掉保護劑中的溶解氧。
復蘇方法
—— 先用70%酒精棉花擦拭安瓿上部,
—— 將安瓿管頂部燒熱,
—— 用無菌棉簽沾冷水,在頂部擦一圈,頂部出現裂紋,用挫刀或鑷子頸部輕叩一下,敲下已開裂的安瓿管的頂端,
—— 用無菌水或培養液溶解菌塊,使用無菌吸管移入新鮮培養基上,進行適溫培養。

 


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