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四環凍干機—生物制品和生物組織凍干技術(二)

更新時間:2023-03-24 點擊次數:408

5.2

菌種和疫苗的凍干

在眾多的菌種保藏方法中,冷凍真空干燥法所提供的低溫、真空條件,可使所保藏的菌種保藏更長的時間。例如,王永成等人對布氏菌株的凍干進行了研究,將凍干保存了14~19年的11株布氏菌株接種、培養后,對其進行觀察,全部存活。另有報道稱凍干保存鼠疫菌25年。

而且在凍干菌株被使用時,只需提供水分使之復水即可再生,方便實際應用。凍干菌株保藏效果也較其他方法優越。

5.2.1醋酸菌菌種凍干

邵偉等人研究了醋酸菌菌種的凍干。將30℃培養2~3天的醋酸菌斜面,分別用3mL的5%、10%和20%的無菌脫脂牛奶洗下,制成菌懸液,充分混勻,用無菌吸管加入無菌安瓿管中。并將它們分2組分別置于-30℃或-60℃預凍2h,然后取出進行冷凍干燥。

冷凍干燥機接通電源后,在溫度降至-40℃時,放入裝有菌體的安瓿管,開啟真空泵,凍干機經過3~5min溫度降至-55℃,待真空表讀數穩定不變后,保持4~8h,然后,將安瓿管封口保存。將經不同方式處理的醋酸菌保藏種置于4~10℃保藏一年后取出,用無菌生理鹽水溶解制成菌懸液,稀釋成不同濃度,再分別涂布于3個培養皿,培養72h觀察計數,取其平均值。預凍溫度對凍干菌的影響見圖5-1。

圖片

圖5-1表明,從細胞存活數的計數統計來看,-60℃預凍的效果相對要好。這是因為菌懸液在-30℃預凍時,其溫度已降到冰點以下,但結冰不夠堅實,真空干燥時易使菌懸液沸騰,菌體細胞受損失較多。而在-60℃預凍時,結冰速率大且堅實,細胞損傷較少。

圖5-2是-60℃預凍并凍干的醋酸桿菌,經不同保藏方式,在不同保藏時間后的活菌數比較。

圖片

圖5-2表明,醋酸菌在一年的保藏期內,凍干保藏的菌種其產酸能力下降較少,基本能保持穩定,而斜面保藏和液體保藏的菌種其產酸能力下降梯度大??梢?,用冷凍干燥法保藏的醋酸菌在保持產酸能力方面有明顯的優勢。





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