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四環凍干機—生物制品和生物組織凍干技術(六)

更新時間:2023-04-27 點擊次數:419

5.3

皮膚的凍干   

凍干皮膚在醫學上的臨床應用研究始于20世紀50年代。動物皮膚的凍干目的是用于對藥物經皮膚滲透性的研究。由于透皮吸收給藥新型的問世,藥物經皮滲透性的研究正成為開發這類新型篩選藥物的重要手段,由于大量長時間動物皮的需求,實際應用時常將待用皮放在冰箱里,可保存1周左右。時間再長,不但影響藥理實驗的穩定性,而且皮膚將變質。為增長皮膚保存期,可將動物皮膚凍干保存;人類皮膚凍干的目的是用于再植,為燒傷或外傷皮膚的病人植皮。

5.3.1 大鼠皮膚凍干工藝及藥物滲透性實驗

東北大學的鄭文利博士早在20世紀末就進行了大鼠皮膚凍干的實驗研究。取活大鼠脫頸處死后,立即用電動去毛刀去其腹部鼠毛,剝離皮膚,除去皮下脂肪層、血管及殘留物,用蒸餾水沖洗干凈,制成不同尺寸的皮片,再用生理鹽水沖洗數次備用。將制備好的大鼠皮放在速率降溫儀中,以-5℃/min、-l5℃/min、-30℃/min三種不同速率降溫至-30℃。將三種不同降溫速率預凍的大鼠皮,分別放入小型凍干機中抽真空,30min后壓力穩定在120Pa,不主動加熱,連續干燥34h后關機,充氮氣后取出,用無菌塑料袋封裝后,放在干燥器內保存。

將以不同預凍速率凍干的大鼠皮膚,經10%福爾馬林固定,石蠟包埋制片,進行病理切片,切片厚度4~5μm,HE染色,再顯微鏡觀察。新鮮大鼠皮組織切片如圖5-8所示,以5℃/min速率預凍并凍干大鼠皮組織切片如圖5-9所示。從圖中可以看出凍干皮組織與新鮮皮組織相本相同,未見細胞破裂、上皮脫離、組織褶皺、細胞變性和細胞間隙增寬等異常,說明凍干皮組織結構未發生變化。其他速率預凍并凍干后的結果基本一致。

凍干大鼠皮角質細胞間隙脂流動性的電子自旋共振(ESR)測定:選  用5-噁唑氮氧自由基硬質酸(5-DSA)作為自旋轉標記物,將新鮮的和  三種不同預凍速率的凍干大鼠皮角質層樣品泡在濃度為1×10-4mol/L  的5-DSA緩沖液(pH=7.4)中12h,保溫20℃,然后取出淋洗干凈,37℃烘箱干燥1h,分別放進電子自旋共振波譜儀樣品管內,再置于腔中。ESR測定條件:掃描寬度200G,接收增益3.2×104,時間常數20.48ms,微波功率5.02mW,掃描時間83.888s,調制頻率  25.000kHz,調制幅度0.947G。經ESR波譜分析得知,三種不同凍  結速率預凍的凍干大鼠皮與新鮮大鼠皮各系數相比無顯著差異,說明  凍干大鼠皮膚未引起表皮細胞間脂質結構的變化,大鼠表皮角質細胞  間脂質排列的有序性沒有改變,流動性沒有增加。

圖片

實驗采用尼莫地平為模型藥物(一種腦血管擴張藥),選用預凍速  率為l5℃/min的凍干大鼠皮和新鮮大鼠皮做藥物滲透性實驗,考察其  組織結構有無變化。實驗采用裝置為V-lia-chien水平擴散池。它是由  兩個等容積的玻璃半池組成,半池內徑為l.35cm,有效擴散面積為  1.43cm2,容積為10mL。半池上方開口為取樣口,池底有凹陷平  臺,起到固定攪拌的作用。實驗時將皮膚固定在擴散池的兩個半池之  間,角質層面向供體池。水化1h后,供體池加入10mL尼莫地平的  30%丙二醇水過飽和溶液,接受池中加入10mL的30%丙二醇水,置  于32℃溫水浴中,磁力攪拌,定時取樣并更換全部接收介質。樣品經  徽孔濾膜(0.45nm)過濾,續濾液,樣品進人高效液相測定。尼莫地平  外含量測定采用高效液相色譜法紫外檢測。色譜條件:色譜柱  Spherisorb46mm×25cm,檢測波長237nm,流動相是甲醇/水  (64/36),流速為1.1mL/min,進樣量10μL。實驗結果如表5-11所  示。

表5-11正常皮膚和凍干皮膚對尼莫地平滲透量比較


圖片

表5-11中的數據表明,在滲透9、10h、12h時,凍干皮膚與正常皮膚對藥物尼莫地的滲透量無顯若性差異??梢?,凍干的大鼠皮膚能夠滿足藥理的實驗要求,可用做透皮制的實驗研究,可以長期貯存備用。



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