糖類保護劑對微生物細胞的凍干脫水具有顯著的保護作用,主要以“水置換的作用"達到保護膜系統的完整性;天然保護劑,如脫脂牛奶、血清、卵黃可以防止微生物細胞在預凍過程中膜脂蛋白分解變性。使用適當比例的牛奶和糖類保護劑可使假絲母菌細胞的存活率從 0.2%提高到 30%~40%。因此,研究中選脫脂牛奶和聚糖為螺旋藻凍干保護劑進行了實驗研究。
準確稱量脫脂奶粉各 10g、5g、2.5g,按比例分別配置成濃度為 20%、10%、5%的脫脂牛奶保護劑;準確稱量葡聚糖各 2g、1g、0.5g,按比例分別配置成濃度為 10%、5%、2.5%的葡聚糖保護劑;螺旋藻培養液 (主要成分為 NaCl,濃度為 0.5mol/L) 和按 1:2例稀釋的稀培養液 (NaCl 濃度 0.25mol/L)。分裝在直徑為 60mm 的玻璃中,各裝 5mL。
分別取 2mL 離心清洗后新鮮螺旋藻放入分裝好的各種保護劑中,搖勻;將準備好的各種物料用冰箱預凍到-30℃,在 GLZ-0.4 冷凍干燥機上干燥,凍干過程冷阱溫度、擱板溫度、物料內部溫度以及干燥室壓力隨時間的變化如圖 6-7 所示。
凍干后的螺旋藻真空封裝,常溫保存 10 天后,復水 10min,然后在倒置顯微鏡下觀測其形態結構。
圖 6-8 為用脫脂牛奶為保護劑凍干螺旋藻后的形態結構。當用不同濃度的脫脂牛奶為保護劑時,對螺旋藻的細胞形態結構都有一定的保護作用,特別是用濃度 10%的脫脂牛奶為保護劑時螺旋藻的螺面不發生變化,完性好,與新鮮螺旋藻的基木一致,但直徑方向存在縮水。
圖 6-9 為用葡聚糖為保護劑凍干螺旋藻后的形態結構??梢钥闯?,葡聚糖在凍干過程中對螺旋藻細胞沒有明顯的保護作用,不適宜作為螺旋藻的凍干保護劑。
圖 6-10 (a) 為純螺旋藻冰箱凍結凍干后的形態結構。與新鮮螺旋藻相比直徑方向有明顯的收縮,且破碎嚴重,完整性差。圖 6-10 (b)為0.5ol/L 的 NaCl培養液作為保護劑時螺旋藻凍干后的形態結構,完整性較好。圖 6-10 (c) 為 0.25mol/L 的 NaCI稀培養液作為保護劑時螺旋藻凍干后的形態結構,直徑方向的收縮明顯減少,幾乎沒有收縮,與新鮮螺旋藻的差不多,完整性也很好。
通過實驗分析得出,10%脫脂牛奶和稀培養液可作為螺旋藻的凍干保護劑。